Les bases de la culture cellulaire

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•   Connaissances scientifiques

Objectifs

S'initier à la culture cellulaire

 COMPÉTENCES DÉVELOPPÉES :

• Identifier ce que doit contenir un milieu de culture complet
• Décrire les caractéristiques propres des organismes pluricellulaires
• Expliquer les propriétés des membranes biologiques
• Construire une cellule eucaryote en 3D et décrire la structure et la fonction des organites intracellulaire
• Expliquer les grands principes de la prolifération cellulaire
• Définir ce qu’est une culture primaire
• Décrire les caractéristiques des cellules apoptotiques
• Identifier les méthodes utilisées pour isoler des cellules à partir d’un organe ou d’un organisme
• Citer les différences entre une lignée cellulaire à durée limitée et une lignée cellulaire continue
• Identifier ce que doit contenir un milieu de culture de base
• Citer les paramètres importants pour une bonne conservation des cellules
• Justifier l’utilisation de la trypsine en culture cellulaire et expliquer son mécanisme d’action sur les cellules
• Citer les constituants du sérum qui promeuvent l’adhérence cellulaire suite à un repiquage avec la trypsine
• Citer les constituants du sérum qui ne sont pas retrouvés dans le milieu de culture de base
• Expliquer comment agit le bleu Trypan et à quoi il sert en culture cellulaire

Public

Personnels scientifiques et techniques voulant s’initier à la culture cellulaire

Pré-requis

Aucun

Programme

Jour 1

1. Généralités

2. Théorie cellulaire

• La cellule, une unité de vie
• Les énoncés de la théorie cellulaire
• Le monde vivant

3. Caractéristiques propres aux organismes pluricellulaires

• Cohésion
• Spécialisation
• Conséquences de la spécialisation cellulaire

4. Structure de la cellule eucaryote

• Membrane plasmique
• Composition
• Caractéristiques
• Noyau
• Cytosquelette
• Reticulum endoplasmique
• Appareil de Golgi
• Mitochondrie
• Conséquence de la compartimentalisation cellulaire

5. Propriétés des membranes

Endocytose

• La perméation
• La phagocytose
• L’endocytose dépendante de la clathrine
• L’endocytose dépendante de la cavéoline
• Les voies d’endocytose

Adhérence cellulaire

• Principes généraux
• Les molécules d’adhérence
• L’adhérence focale Les jonctions d’adhérence

Communication cellulaire

• Les différents types de communication
• Les protéines G
• Les récepteurs aux protéines G
• Les voies de signalisation via les RCPG
• La voie des facteurs de croissance

6. Prolifération, différenciation et mort cellulaire

Prolifération cellulaire

• Le cycle cellulaire
• L’appareil mitotique
• La régulation du cycle cellulaire

Différenciation cellulaire

• L’hématopoïèse
• Vasculogenèse et angiogenèse

Mort cellulaire

• Caractéristiques des cellules apoptotiques
• Méthodes de mise en évidence des cellules apoptotiques
• Apoptose et nécrose Les caspases
• Les voies de l’apoptose

Jours 2 et 3

Introduction

• Définition
• Historique (acquisition des méthodes et évolution de la culture cellulaire)

1. Les modalités d’obtention des cellules

• A partir de cellules en suspension
• A partir d’explants entiers
• A partir d’explants dissociés
• Dissociation mécanique
• Dissociation enzymatique
• Dissociation chimique

2. Les systèmes cellulaires

• Les cultures primaires
• Les lignées cellulaires à durée de vie limitée - Notion de sénescence cellulaire
• Les lignées cellulaires continues - Notions d’immortalisation et de transformation
• Le choix d’une lignée cellulaire
• La caractérisation des lignées cellulaires
• Les hybridomes Les cellules souches
• Les banques de cellules

3. Les systèmes de culture

• La culture d’organes
• La culture d’explants
• La culture organotypique

4. La culture de cellules

• La culture de cellules en suspension
• La culture de cellules adhérentes (avec ou sans matrice extracellulaire)
• La culture en monocouche
• La culture en trois-dimensions

5. La prolifération cellulaire et le passage

• La courbe de croissance des cellules
• Le comptage cellulaire
• Le repiquage (ou passage) des cellules
• Le temps de doublement

6. Les conditions de culture

• Le pH
• La température
• L’osmolarité
• L’oxygène

7. Les milieux de culture

• Les solutions salines équilibrées
• Les constituants du milieu de culture
• Les antibiotiques Le sérum
• Les milieux définis sans sérum
• Le renouvellement du milieu de culture

8. La conservation des cellules

• La congélation
• La décongélation
• L’organisation des stocks cellulaires (« cellbanking»)

9. Les bonnes pratiques de culture cellulaire

• Les contaminations (dont mycoplasmes) et la prévention
• L’environnement de culture (PSM et laboratoire de type L2)
• Les bonnes pratiques de laboratoire
• Gestes sous PSM
• Aspects réglementaires