Les bases de la biologie moléculaire

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•   Connaissances scientifiques

Objectifs

• Acquisition des concepts de base de la Biologie Moléculaire
• Appréhender la relation entre les macromolécules informationnelles : de l’ADN aux protéines
• Présenter les techniques de base d’étude des acides nucléiques à la base du génie génétique
• Aborder des exemples concrets de manipulation de base réalisées dans un laboratoire
• Connaitre les systèmes de base utilisés pour la production de protéines recombinantes

Public

Personnels techniques et scientifiques

Programme

 I/ LA BIOCHIMIE DES ACIDES NUCLEIQUES

1/ La structure des nucléotides

• Les bases azotées
• Les sucres
• Les groupements phosphate
• Le nucléotide
• ADN versus ARN

2/ Les polynucléotides

3/ L’ADN

• La double hélice
• La dénaturation et renaturation

4/ L’ARN

II. L’ORGANISATION DE L’ADN DANS LA CELLULE

1/ Définition de la biologie moléculaire

2/ Historique

• Les origines de l’ADN
• Vers la compréhension du rôle de l’ADN

3/ Définition moléculaire du gène

4/ La structure des génomes

5/ Les chromosomes

III/ LE FONCTIONNEMENT DU GENE

La réplication

1/ La réplication semi-conservative

2/ Les mécanismes moléculaires de la réplication

• Les ADN polymérases
• L’initiation de la réplication
• L’élongation
• La terminaison de la réplication

La transcription

1/ La structure des ARN

2/ Les différents ADN

3/ Principe de la transcription

• L’unité de transcription
• La transcription chez les procaryotes
• La transcription chez les eucaryotes

4/ Comparaison procaryote/eucaryote

La traduction

1/ Les acides aminés

2/ Le code génétique

3/ Les ARN de transfert et les ribosomes

4/ La traduction chez les procaryotes

5/ La traduction chez les eucaryotes

6/ Les modifications post-traductionnelles

IV/ LE GENIE GENETIQUE

A. Les méthodes d’analyse des acides nucléiques

1/ L’extraction et la purification des acides nucléiques

2/ le dosage et la séparation des acides nucléiques

B. Les outils enzymatiques

1/ Les nucléases

2/ Les enzymes de modifications

C. L’analyse et la détection des acides nucléiques

1/ Les sondes moléculaires

2/ L’hybridation moléculaire

3/ Le séquençage de l’ADN

D. L’amplification des acides nucléiques

1/ le clonage moléculaire

2/ La PCR et RT-PCR

E. Les applications aux biotechnologies

V. PRODUCTION DE PROTEINES RECOMBINANTES

A. Introduction

• Définitions
• Les différentes applications. Les différents choix du système
• Les différentes étapes
• Les 1ères AMM
• Le marché français

B. Les bactéries

• Les promoteurs
• Les vecteurs
• La transformation
• Avantages et inconvénients

C. Les levures

• Saccaromyces cerevisiae : vecteurs, exemples
• Pichia pastoris : vecteurs, exemples
• La transformation
• Avantages et inconvénients

D. Les cellules eucaryotes

• Les vecteurs
• Différentes méthodes de transfection
• La transfection stable
• La transfection semi-stable
• Les cellules
• Avantages et inconvénients

E. Les cellules d'insectes

• La stratégie du baculovirus
• Les cellules
• Les conditions de culture
• Avantages et inconvénients

F. Les plantes

• Régénération à partir d’une cellule
• Les transferts de gènes
• Avantages et inconvénients

G. Les animaux

• Le transfert de gènes
• Le choix du promoteur en fonction de l’animal
• Exemples

H. Les systèmes acellulaires, la purification et le contrôle qualité.