CRISPR/Cas9 (Technique d'édition de génome)

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Objectifs

• Connaitre des mécanismes fondamentaux d’édition génomique.
• Connaitre les principales possibilités offertes par la méthode CRISPR/Cas9
• Connaitre les limites techniques de la méthode CRISPR/Cas9 et les contrôles nécessaires à sa mise en œuvre.
• Savoir concevoir un protocole adapté à son projet, et choisir entre la voie NHEJ ou HDR
• Etre capable de designer des ARN guides et des oligonucléotides matrice
• Pouvoir suivre et évaluer les évolutions futures de la technologie.

NB:
==> Si vous avez déjà des questions sur vos cas pratqiues, n'hésitez pas à les noter pour en parler en formation.

Public

Personnels scientifiques et techniques voulant s’initier à la technologie CRISPR/Cas9

Pré-requis

Avoir des connaissances en génétique

Programme

Partie 1 – Présentation générale de la méthode CRISPR/cas9

-Généralités :

Apercu général des méthodes du génie génétique.

CRISPR/Cas9 : détourner une défense bactérienne naturelle pour l’édition génétique.

L’avènement de CRISPR/Cas9 : pourquoi c’est une révolution.

Déclinaison de la méthode pour des utilisations variées.

-Mise en œuvre :

Paramètres définissant l’ efficacité de l’édition génétique

Paramètres définissant la spécificité de l’édition génétique

Prédictions bioinformatiques et optimisation de la conception des ARN guides.

Prise en compte a posteriori des mutations imprévues « off-target »

Favoriser  la mutagénèse dirigée par rapport à l’édition génétique aléatoire.

Optimisation de la conception des oligonucléotides matrices.

-Développements actuels et futures

Modification des propriétés de la nucléase Cas9

Les autres nucléases ARN dépendantes.

Edition épigénétique. Utilisation de Cas9 comme plate-forme de développement.

Criblages à grande échelle.

Partie 2 – Travaux Tutorés

Considérations pratiques pour le design des ARN guides et des oligonucléotides matrices (ssODN).

TP: Design d’un projet d’invalidation génique (via la voie NHEJ).
TP: Design d’un projet de mutations ponctuelles (via la voie HDR).

NB:
==> Si vous avez déjà des questions sur vos cas pratqiues, n'hésitez pas à les noter pour en parler en formation.

Méthodes pédagogiques

Théorie et pratique