PCR Quantitative (PCR : polymerase chain reaction)

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•    Franck LETOURNEUR
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Objectifs

A l'issue de la formation, le stagiaire devra être autonome, capable de dessiner, mettre au point et réaliser un projet d’analyse d’expression génique différentielle par PCR en temps réel.

Cette formation lui permettra d'acquérir les connaissances théoriques et pratiques nécessaires pour maitriser toutes les étapes depuis le contrôle qualité des échantillons jusqu’à l’analyse statistique des résultats (en suivant les bonnes pratiques exigées par la communauté scientifique).

(==>Merci d'apporter votre ordinateur pour cette formation)

NB : Le contexte sanitaire nous contraint à limiter le nombre de participants aux sessions de formation. Dans l’éventualité où  la formation serait proposée à distance, vous serez immédiatement contacté.e. 

Public

Techniciens,ingénieurs et chercheurs

Pré-requis

Connaissances de base en biologie moléculaire

Programme

Jour 1 :

Matin :  

- Tour de table et présentation du programme
- Description générale du projet support du TP
- Présentation théorique des ateliers de l'après midi

Après-midi : 3 ateliers pratiques

1- QC des échantillons :
Bioanalyseur, Nanodrop
Analyse des résultats en temps réel

2- Lancement des RT et leurs contrôles

3- Design des couples d'amorces – TP

Jour 2 :

Matin : 

1- Atelier pratique : test couples d'amorces des gènes cibles

2- Présentation principes généraux de la PCR quantitative en temps réel 

(Méthode ΔΔCq)

Après midi:

1- Analyse des résultats de test du matin et choix du couple à valider

2- 2 Ateliers pratiques

- Test d’efficacité des couples de gènes cibles
- Mesure d’expression des gènes de référence sur les échantillons du projets

Jour 3 :

Matin :  

1- Analyse des résultats  :

- Gammes gènes cibles : calcul des efficacités des couples de gènes cibles
- Choix des gènes de normalisation

Après midi:

2- Atelier pratique : Mesure expression des gènes cibles sur les échantillons du projet

Jour 4 :

Matin :  

1- Analyse des résultats  :

Calcul des RQ, NRQ, FC

2- Analyses statistiques

Après midi:

-Tour de table
-Questions diverses

Méthodes pédagogiques

Alternance de présentations théoriques, d'application pratiques et  discussions des résultats obtenus